再也不用为加标实验回收率低烦恼了

各位老师朋友们，大家好，又到了每周干货时间。

第一期我们介绍了SPE小柱流速慢的原因，并分享了解决方案。

实验小技巧丨教您几招，治疗SPE小柱流速慢难题！

这一期继续给各位老师带来样品前处理的干货——回收率低的原因和解决方案大放送。

首先我们先了解一般的样品前处理过程。样品前处理过程基本上可以分解成以下9个步骤：柱子选择——样品提取——小柱活化平衡——小柱上样——淋洗小柱——洗脱样品——氮吹浓缩复溶——过滤——样品上机。

回收率低的原因比较复杂，可能出现在前处理过程中的每个步骤里面，所以我们应该依次对每个步骤进行排查，具体排查方法见如下表格，清晰明了。

以上排查秘籍，大家请收好，以后再碰到回收率低的问题，就可以对照此表格进行排查，相信可以很快找到原因哦。

在该表格中介绍了一个排查的小技巧——分步收集。

这是一个非常好用的小技巧。分步收集，顾名思义，即在上样步骤，淋洗步骤，洗脱步骤，分别接收上样液，淋洗液，和洗脱液。通常来说，目标物存在于洗脱液中，只要接收洗脱液就可以了，但是出现回收率低的问题的时候，就有必要去排查上样和淋洗的步骤，因为根据物质守恒的原理，目标物无外乎存在于4个地方：1：小柱 2：上样液 3：淋洗液 4：洗脱液。通过分步收集的方法就可以知道，目标物到底存在于哪一步骤中。大家get到了吗？大家以后可以把这个小技巧多多运用在自己的实验过程中哦。

下面再给大家分享两个经典案例

1、CNW GCB/NH2柱子做敌百虫时发现回收率很低

处理过程：客户做土壤中敌百虫的检测，液质质检测，而且是标准加标回收，开始她没有接收上样液，推测是上样液没接收导致回收率低，后来客户接收上样液后，还是回收率较低，与客户一起做实验，2mL丙酮上样，10mL 乙腈：甲苯=3:1 洗脱，氮吹近干后加液质流动相定容，回收率只有20%，用乙腈二次洗脱（分步收集的应用），没有敌百虫残留；查文献敌百虫沸点只有100℃，怀疑氮吹损失了，后来取0.5mL标准品氮吹后流动相定容，与纯标品进样比较，发现损失了25% ，客户改用旋蒸的方法代替氮吹，敌百虫基本上很少有损失。

原因分析：敌百虫沸点低，当氮吹时间长，流量大时就会对其回收率造成很大的影响。可以换成旋蒸的方式减轻影响，推测旋蒸效率高，时间短，敌百虫很难挥发。

2、奶粉中三聚氰胺的检测实验回收率很低

处理过程：客户按照国标GB/T 22388-2008，液质检测，做标准品加标回收没有问题，但做奶粉（飞鹤三段婴幼儿奶粉）基质 回收率就很低，大概10%；在实验室做奶粉基质实验，液相检测，回收率在97%以上；客户后来用CNW MCX小柱和其它品牌小柱进行对比，发现做下来两者回收率都很低，后来经排查发现标准曲线是溶剂配标曲线，确定是基质效应的影响。验证：客户用溶剂溶解标准品进样，响应值达到4000，基质溶解标准品，响应值只有200，客户反映用空白基质过小柱后的洗脱液配标准品作为基质标准品，回收率做下来有100%左右。

原因分析：三聚氰胺实验作为一个经典的实验，一般不会有太大问题，因为三聚氰胺实验大都是用液相进行检测，但是客户液相很忙，所以用液质来做，液质由于质谱检测器，有明显基质抑制效应，所以客户做下来回收率低，用基质配标准品就可以规避了这一效应，特别是化合物中含氮的，更容易受到基质效应的影响，随着液质的普及，越来越多的化合物会用液质来检测，与液质相关的问题也会越来越多。

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